Cell Meter Annexin V凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 適合流式細胞檢測 通過對磷脂酰絲氨酸(PS)進行檢測，而實現(xiàn)細胞凋亡的檢測。在凋亡細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）從胞內(nèi)移位到胞外表面，因此PS出現(xiàn)在細胞的外表面可以作為細胞凋亡的起始或者中間階段的通用指示器，也可以通過其形態(tài)學(xué)改變來測定。該試劑盒采用獨有的綠色熒光染料（FITC的優(yōu)越替代物，使用FITC通道檢測）標(biāo)記的Annexin V檢測凋亡細胞，同時包含PI紅色熒光染料用于對壞死細胞進行染色。試劑盒內(nèi)組分經(jīng)過特別優(yōu)化，尤其適合于流式細胞分析。目前商業(yè)化各種Annexin V凋亡檢測試劑盒一般是將Annexin V進行傳統(tǒng)的熒光團（FITC、Cy3）標(biāo)記后作為熒光探針，通過檢測細胞凋亡早期細胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS），從而實現(xiàn)對細胞凋亡的檢測。然而目前的檢測受到熒光顏色、熒光強度和檢測靈敏度等因素的限制。Cell Meter Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit系列產(chǎn)品分別采用了mFluor Violet和iFluor熒光染料，這種染料比傳統(tǒng)的FITC、Cy3等具有更高的熒光強度、更低的熒光背景和更優(yōu)秀的光穩(wěn)定性，因此檢測效果更靈敏穩(wěn)定；而iFluor系列染料在保證上述優(yōu)勢的同時，均在405nm處激發(fā)，尤其適合用于多色分析。

操作步驟

1.用測試化合物處理細胞一段時間（用喜樹堿處理的Jurkat細胞4-6小時）以誘導(dǎo)細胞凋亡。

2.離心細胞，得到1-5×10⁵個細胞/管。

3.將細胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μL膜聯(lián)蛋白V-iFluor 488（組分A）加入細胞中。

5.可選：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于壞死細胞。

6.在室溫下孵育30至60分鐘，避光。

7.可選：在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

8.使用具有FL1通道的流式細胞儀（Ex / Em = 490 / 525nm）監(jiān)測膜聯(lián)蛋白V-iFluor 488的熒光強度。當(dāng)?shù)饣ぜ尤爰毎麜r，使用FL2通道測量細胞活力。