該特定試劑盒設(shè)計用于在Ex / Em =575/597nm處以大斯托克斯位移的紅色熒光標(biāo)記活細(xì)胞的溶酶體。該試劑盒使用專有的溶解性染料，可能通過溶酶體pH梯度選擇性地積聚在溶酶體中。該指示劑中的溶質(zhì)，是一種疏水性化合物，很容易滲透到完整的活細(xì)胞，并被保留在溶酶體內(nèi)一段時間。進入溶酶體后，其熒光顯著增強。這一關(guān)鍵特征顯著降低了其染色背景，使其可用于多種研究，包括細(xì)胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細(xì)胞活力，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該試劑盒提供所有必要組件。 它適用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。

樣品示例及使用方法

1.準(zhǔn)備溶酶體染色溶液：

1.1  取出試劑盒中A、B組分，室溫避光靜置5-10min。

1.2  移取20μLLysoBrite Red（組分A），用10mL活細(xì)胞染色緩沖液（組分B）進行稀釋，制備染料工作液。

注意：1) 20μL的500XLysoBrite Red （組分A）足夠完成一個96孔板，根據(jù)要求分裝并儲存未使用的500XLysoBrite Red（組分A）,避免反復(fù)凍融。

        2)熒光溶酶體指示劑的最佳濃度根據(jù)實際應(yīng)用而改變，可以根據(jù)探針的滲透性對細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的染色條件進行調(diào)整。

2.細(xì)胞染色：

2.1對于貼壁細(xì)胞：

在96黑色/透明微孔板（100μL/孔/ 96孔板）或裝有適當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)皿的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞達到所需的匯合時，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)加入等量的LysoBrite Red工作液，在37℃、5％CO₂條件下培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，用預(yù)溫(37°C) Hanks和20 mM Hepes緩沖液(HBSS)或自配的緩沖液清洗細(xì)胞兩次，用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細(xì)胞孔，再使用配有TRITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞，使之帶紅色熒光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意：1）如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議適當(dāng)增加染料濃度或孵育時間。

2.2對于懸浮細(xì)胞：

向細(xì)胞中加入等量的LysoBrite Red工作液。在37℃、5％CO₂條件下培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，用預(yù)溫(37°C) Hanks和20 mM Hepes緩沖液(HBSS)或自配的緩沖液清洗細(xì)胞兩次，用HBSS或生長培養(yǎng)基填充細(xì)胞孔，再使用配有TRITC過濾器組的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞，使之帶紅色熒光(Ex/Em = 575/600 nm)。

注意:  1）如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議適當(dāng)增加染料濃度或孵育時間。

         2）懸浮細(xì)胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為貼壁細(xì)胞染色。