該試劑盒使用專有染料，可選擇性累積在線粒體中，可能是線粒體膜電位梯度。線粒體指示劑是一種疏水性化合物，可以很容易地滲透完整的活細(xì)胞，并在進(jìn)入細(xì)胞后被困在線粒體中。該熒光線粒體指示劑長時間保留在線粒體中，因?yàn)樵撝甘緞y帶細(xì)胞保留組。這一關(guān)鍵特征顯著提高了染色效率。標(biāo)簽協(xié)議是健壯的，需要最少的動手時間。它可以很容易地適用于各種熒光平臺，如微孔板分析，免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)。它適用于多種研究，包括細(xì)胞粘附，趨化性，多藥耐藥性，細(xì)胞活力，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該試劑盒為所有重要組分提供了優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案。它適用于增殖和非增殖細(xì)胞，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。

樣品分析

1.準(zhǔn)備線粒體染色溶液：

1.1將所有組件溫度調(diào)至室溫

1.2通過將20μLMitolite NIR（組分A）稀釋到10mL活細(xì)胞染色緩沖液（組分B）中制備染料工作溶液

注1：對于一個96孔板，20μL的500X Mitolite NIR（組分A）就足夠了。在≤-20oC下等分并儲存未使用的500X Mitolite NIR。避光，避免反復(fù)凍融循環(huán)

注2：熒光線粒體指示劑的最佳濃度根據(jù)具體應(yīng)用而變化?？梢愿鶕?jù)特定細(xì)胞類型和細(xì)胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件

2.準(zhǔn)備和染色細(xì)胞：

2.1對于粘附細(xì)胞：在96孔黑色墻壁/透明底板上或在裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需的匯合時，加入等體積（例如對于96孔板為100μL，對于384孔板為25μL）的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細(xì)胞在37oC，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注意：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或孵育時間以使染料積累。

2.2對于懸浮細(xì)胞：以1000rpm離心細(xì)胞5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀并吸出上清液。在預(yù)熱（37℃）生長培養(yǎng)基中輕輕重懸細(xì)胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細(xì)胞在37oC，5％CO₂培養(yǎng)箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養(yǎng)基緩沖液）替換染料上樣溶液。

注1：如果細(xì)胞看起來沒有充分染色，建議增加標(biāo)記濃度或培養(yǎng)時間以使染料積累。

注2：懸浮細(xì)胞可以附著在用BD Cell-Tak?（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細(xì)胞染色（見步驟2.1）。