羥芪巴脒(也稱為Fluoro Gold)用于染色DNA和RNA。與RNA相比,當與DNA結(jié)合時,它表現(xiàn)出明顯不同的熒光發(fā)射譜。該陽離子染料也經(jīng)常用作逆行神經(jīng)元示蹤劑。
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
C0302 | 羥芪巴脒DNA和RNA 染料 | 10 mg | 1236RMB |
染色細胞示例
羥芪巴脒的使用與其他熒光示蹤劑基本相同。主要區(qū)別在于Fluoro-Gold在注射后存活時間,濃度范圍,組織治療和與其他組織化學技術的兼容性方面更靈活。 它比大多數(shù)其他熒光示蹤劑更耐褪色,更亮和熒光時間更長。
1.染料濃度:建議使用1至10%羥基芪脒。最初,建議濃度為4%。如果在注射部位發(fā)生壞死,或標記太強,則將濃度降低至2%溶液。
2.染料管理:
2.1壓力注入 - 注射的體積范圍為0.05-1μl,通常為0.1-0.2μl。
2.2結(jié)晶 -可以從微量移液管的尖端施用示蹤劑的晶體。
3.固定劑:可以使用任何固定劑或不使用固定劑,但最常使用含有4%甲醛的PBS。含有高濃度重金屬(如鋨,汞)的固定劑會淬滅熒光,而高濃度(超過1%)的戊二醛可能會增加背景熒光。
4.組織化學處理:含有羥基芪脒的組織可以根據(jù)幾乎任何常見的組織學技術進行處理。最常使用固定組織的冷凍切片。
5.適用實驗:可以進一步處理切片用于第二標記,例如放射自顯影,HRP組織化學,免疫細胞化學,第二熒光示蹤劑,熒光復染劑等。
6.固定、覆蓋:通常將切片安裝在涂有明膠的載玻片上,風干,浸入二甲苯中,并用非熒光DPX塑料封固劑蓋上蓋玻片。切片可以用分級醇脫水,除非這與第二示蹤劑不相容。如果將羥基噻嗪與熒光免疫細胞化學組合,則將切片風干并直接用DPX蓋上蓋玻片。
7.照相:使用寬帶紫外激發(fā)濾光片(激發(fā) - 323nm,發(fā)射 - 中性pH為620nm),用熒光顯微鏡觀察羥基芪脒。當用中性pH緩沖液處理組織時發(fā)出金色,而當用酸性(例如PH3.3)pH緩沖液處理組織時發(fā)出藍色。它可以用數(shù)碼或膠片拍攝(使用Ektachrome 200-400 ASA膠片進行彩色打印,使用可比較的速度膠片進行黑白打印)。大多數(shù)曝光時間范圍為10-60秒曝光,具體取決于物鏡放大倍數(shù)和標記強度。三十(30)秒的暴露是平均的??梢岳枚啻伪┞秮硗瑫r顯現(xiàn)羥基噻嗪和另一種示蹤劑。因此,UV將與明場照明相結(jié)合,以在放射自顯影中同時定位具有HRP或銀顆粒的Fluoro-Gold。類似地,藍光激發(fā)可以組合以也可視化FITC的綠色發(fā)射顏色,而綠色激發(fā)光可以用于同時觀察碘化丙啶或溴化乙錠(熒光復染劑)的紅色發(fā)射顏色。